Обсуждени е результатов
Страница 2

Условия проведения гидролиза 2Н-меченого БР определялись необходимостью предотвращения реакций изотопного (1Н-2Н) обмена водорода на дейтерий в молекуле фенилаланина и сохранения остатков триптофана в белке. Рассматривались два альтернативных варианта - кислотный и щелочной гидролиз. Кислотный гидролиз белка в стандартных условиях (6 н. HСl или 8 н. H2SO4, 1100С, 24 ч), как известно, приводит к полному разрушению триптофана и частичному разрушению серина, треонина и некоторых других аминокислот в белке [10], которые для настоящего исследования не играют существенной роли. Модификация этого метода, заключающаяся в добавлении в реакционную среду фенола [11], тиогликолевой кислоты [12], b-меркаптоэтанола [13], позволяет сохранить до 80-85% триптофана. Использование п-толуолсульфокислоты с 0.2% 3-(2-аминоэтил)-индолом или 3 М меркаптоэтансульфокислоты [14] также эффективно для сохранения триптофана (до 93%) [15]. Однако для решения поставленной задачи вышеперечисленные методы непригодны, поскольку обладают существенным недостатком: в условиях кислотного гидролиза с высокой скоростью происходит изотопный обмен ароматических протонов (дейтеронов) в молекулах триптофана, тирозина и гистидина [16], а также протонов при атоме С3 аспарагиновой и С4 глутаминовой кислот [17]. Поэтому даже проведение гидролиза в дейтерированных реагентах (6 н. 2HCl, 4 н. 2H2SO4 в 2H2O) не позволяет получать реальные данные о включении дейтерия в белок. http://sportcity74.ru/ товары с aliexpress для рыбалки. TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT

В условиях щелочного гидролиза (4 н. Ba(OH)2 или 4 н. NaOH, 1100C, 24 ч) реакций изотопного обмена водорода практически не наблюдается (исключением является протон (дейтерон) у атома С2 гистидина, а триптофан не разрушается, что определило выбор метода гидролиза в настоящей работе. Упрощение процедуры выделения смеси свободных аминокислот за счет нейтрализации серной кислотой явилось причиной выбора в качестве гидролизующего агента 4 н. Ba(OH)2. Возможная D,L-рацемизация аминокислот при щелочном гидролизе не влияла на результат последующего масс-спектрометрического исследования уровня дейтерированности молекул аминокислот.

Таблица.

Величины пиков (М)+ в масс-спектре электронного удара метиловых эфиров N- Dns-[2, 3, 4, 5, 6-2H5]фенилаланина, N-Dns-[3, 5-2H2]тирозина и N-Dns-[2, 4, 5, 6, 7-2H5]триптофана.

Соединение

Величина пика (М)+

Интенсив-ность, %

Количество атомов дейтерия

Уровень дейтерированности, % от общего количества атомов водорода

N- Dns-[2, 3, 4, 5, 6-2H5]Phe-Ome

413

414

415

416

417

418

7

18

15

11

14

6

1

2

3

4

5

6

13

25

38

50

63

75

N-Dns-[3, 5-2H2]Tyr-OMe

428

429

430

12

15

5

-

1

2

-

14

29

N-Dns-[2, 4, 5, 6, 7-2H5]Trp-OMe

453

454

455

456

457

5

6

9

11

5

2

3

4

5

6

26

38

50

64

77

Страницы: 1 2 3 4

Статьи и публикации:

Трансфитогенные (трансабиотические) взаимоотношения между растениями. Типы и их характеристика
Микориза – симбиотические отношения м/у высшими раст. и грибами. Суть была установлена Каменским, что подъельник не может развиваться из семян в отсутствие опр. вида гриба в окр. среде. Для высш. растений, на корнях кот. поселяются гриб ...

Типы боли
Боль как модальность можно отнести к тому или иному типу, исходя из места её возникновения. Эта классификация показана на рис.1. БОЛЬ СОМАТИЧЕСКАЯ ВИСЦЕРАЛЬНАЯ ПОВЕРХНОСТНАЯ ГЛУБОКАЯ ВИСЦЕРАЛЬНАЯ ...

Органы размножения
Органы размножения расположены в полости тела рыб ! состоят из половых желез: яичников у самок, семенем ков .у самцов. Семенник вырабатывает сперму (молоки),шчник — икру. Молоки — это жидкость белого цвета,состоящая из сперматозоидов. В г ...

Разделы