Пожалуй, наиболее объективным критерием чистоты выделенной мембранной фракции является присутствие в ней какого-либо уникального компонента, который содержится только в этой мембране или является в ней преобладающим. Обычно такими компонентами служат ферменты, которые в данном случае называют маркерами. Список маркерных ферментов, которые используются для контроля чистоты мембранных фракций, приведен в табл.1.2 При определении активности фермента следует принимать во внимание, что он может находиться в латентной форме, например благодаря тому, что локализуется на внутренней поверхности выделяемых мембранных везикул. Другие проблемы, связанные с оценкой чистоты выделенных мембран, рассмотрены в обзоре. Следует отметить, что рекомендуемые методы в большинстве случаев достаточно хорошо отработаны и стандартизованы. TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
В ряде случаев более удобными мембранными маркерами являются не ферменты, а специфические рецепторы лектинов, гормонов, токсинов или антител. Если изучаемые системы хорошо охарактеризованы, то о чистоте мембранной фракции можно судить по ее белковому составу, определяемому с помощью электрофореза в полиак-риламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия. Например, наружная мембрана грамотрицательных бактерий имеет характерный набор полипептидов, которых нет в цитоплазматической мембране.
Таблица 1.2 Маркеры, используемые для контроля чистоты мембранных фракций, выделяемых из клеток млекопитающих "
Мембранная фракция |
Маркерный фермент |
Плазматические мембраны |
5 '-Нуклеотидаза |
Щелочная фосфодиэстераза | |
Na */К+-АТРаза (базолатераль- | |
ная мембрана эпителиальных | |
клеток) | |
Аденилатциклаза (базальная | |
мембрана гепатоцитов) | |
Аминопептидаза (мембрана | |
щеточной каемки эпителия) | |
Митохондрии (внутренняя |
Цитохром с-оксидаза |
мембрана) |
Сукцинат-цитохром с-оксидо- |
редуктаза | |
Митохондрии (наружная |
Моноаминооксидаза |
мембрана) | |
Лизосомы |
Кислая фосфатаза |
0-Галактозндаза | |
Пероксисомы |
Каталаза |
Уратоксидаза | |
Оксидаза D-аминокислот | |
Мембраны аппрата |
Галактозилтрансфераза |
Гольджи | |
Эндоплазматический |
Глюкозо-6-фосфатаза |
ретикулум |
Холинфосфотрансфераза |
NADPH-цитохром с-оксидо- | |
редуктаза | |
Цитозоль |
Лактатдегидрогеназа |
Статьи и публикации:
Каналы
Под каналами чаще всего понимают ионные каналы, которые, как теперь известно, широко распространены во многих типах клеток. Регулируемые ионные каналы, участвующие в передаче сигнала, в ответ на определенный внешний стимул быстро изменяют ...
Терминальная
дезоксинуклеотидил-трансфераза
а. Полимеризация без матрицы
Терминальная дезоксинуклеотидилтрансфераза является в определенном смысле полимеразой, поскольку она катализирует синтез полидезоксирибо-нуклеотидов из дезоксирибонуклеозидтрифосфатов с высвобождением неорган ...
Сырье, содержащее алкалоиды — производные изохинолина
К этой группе относится сырье, заготовляемое как от дикорастущих, так и от культивируемых растений: трава мачка желтого, клубень стефании гладкой, лист унгернии Виктора. В настоящее время из всех видов мака возделывается только мак снотво ...